アミノアシルtRNAヒドロラーゼ(Aminoacyl-tRNA hydrolase、EC 3.1.1.29)は、以下の化学反応を触媒する酵素である。 N-置換アミノアシルtRNA + 水N-置換アミノ酸 + tRNA 従って、基質はN-置換アミノアシルtRNAと水の2つ、生成物はアミノ酸と転移RNAの2つである。 この酵素は加水分解酵素に分類され、特にエステル結合に作用する。系統名は、アミノアシルtRNA アミノアシルヒドロラーゼ(aminoacyl-tRNA aminoacylhydrolase)である。
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